PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

ABSTRACT.- Melo A.N., Santos Júnior E.R., Silva D.E., Adrião M., Porto A.L.F. & Wischral A. 2017. [IGF-2 mRNA expression in oocytes and cumulus cells of antral and preantral native sheep follicles in Pernambuco State, Brazil.] Expressão do mRNA paraIGF-2 em oócitos e células do cumulus extraídos de folículos antrais e pré-antrais de ovelhas nativas do Estado de Pernambuco. Pesquisa Veterinária Brasileira 37(5):526-530. Núcleo de Educação em Ciências Agrárias, Universidade Federal de Sergipe, Avenida 26 de Setembro 1126, Nossa Senhora da Glória, SE 49680-000, Brazil. E-mail: arthurnascimento@gmail.com The aim of this study was to analyze the mRNA expression of IGF-2 growth factor in oocytes and cumulus cells from native sheep follicles at different stages of follicular development. The classified morphologically as antral follicles (tertiary preovulatory) were aspirated manually to obtain the oocyte and the cumulus cells. The preantral follicles (secondary) were extracted from the ovarian cortex by microdissection, and oocytes were removed. In both groups, oocytes were denuded and grouped into “pools” of ten cells each (Group A, n=10, Group B, n=10) and ten samples with groups of cumulus cells (Group A1, n=10; B1, n=10). The mRNA was extracted and converted to cDNA using the RT-PCR technique. The expression analysis confirmed the expression of IGF-2 gene for groups of oocyte and the cumulus cells. There was an increase in the relative expression of mRNA for IGF-2 for groups of oocytes during the later stage of follicular development and differences were considered significant (p<0.05). There was no significant variation in the expression of IGF2 between groups of cumulus cells. It is concluded that the growth factor IGF-2 has higher levels of expression in sheep oocytes in the second stage of follicular development in the conditions adopted and similar expression in cumulus cells during various stages of follicular development.

• Oocytes cumulus cells follicles oócitos cúmulus folículos ovócitos gene

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Melo A.N., Santos Júnior E.R., Silva D.E., Adrião M., Porto A.L.F. & Wischral A. 2017. [IGF-2 mRNA expression in oocytes and cumulus cells of antral and preantral native sheep follicles in Pernambuco State, Brazil.] Expressão do mRNA paraIGF-2 em oócitos e células do cumulus extraídos de folículos antrais e pré-antrais de ovelhas nativas do Estado de Pernambuco. Pesquisa Veterinária Brasileira 37(5):526-530. Núcleo de Educação em Ciências Agrárias, Universidade Federal de Sergipe, Avenida 26 de Setembro 1126, Nossa Senhora da Glória, SE 49680-000, Brazil. E-mail: arthurnascimento@gmail.com Objetivou-se avaliar a expressão do mRNA para o gene do fator de crescimento IGF-2 em oócitos e células do cumulus de ovelhas em diferentes estágios do desenvolvimento folicular. Os folículos classificados morfologicamente como antrais (terciários e pré-ovulatórios) foram aspirados manualmente para obtenção dos oócitos e células do cumulus. Os folículos pré-antrais (secundários) foram extraídos do córtex ovariano, por microdissecção, e os oócitos retirados. Nos dois grupos, os oócitos foram desnudados e agrupados em “pools” de dez células cada (Grupo A, n=10; Grupo B, n=10) e dez amostras com grupos de células do cumulus (Grupo A1, n=10, B1, n=10). O mRNA foi extraído e convertido em cDNA utilizando a técnica da RT-PCR, utilizando Oligo DT randômico para o mRNA. A análise da expressão confirmou a expressão gênica para IGF-2 nos grupos de oócitos e células do cumulus. Houve um aumento da expressão relativa do mRNA para IGF-2 nos grupos de oócitos durante a fase mais tardia do desenvolvimento folicular e as diferenças foram consideradas significantes (p<0,05). Não houve variação significante da expressão de IGF2 entre os grupos de células do cumulus. Conclui-se que o fator de crescimento IGF-2 tem níveis mais elevados de expressão em oócitos ovinos, na segunda fase do desenvolvimento folicular, mas expressão semelhante em células do cumulus durante as fases estudadas do desenvolvimento folicular.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Teixeira M.J.D., Sobral A.P.V., Abreu-e-Lima M.C., Maia F.C.L., Christilis M., Souza D.M.B., Adrião M. & Wischral A. 2011. [Evaluation of immunohistochemical over expression of p53 protein and of mutations in exon 8 of Tp53 gene in canine mammary carcinomas and normal mammary glands.] Avaliação da superexpressão da proteína p53 e das mutações no éxon 8 do gene TP53 em carcinomas mamários caninos e glândulas normais. Pesquisa Veterinária Brasileira 31(6):521-523. Departamento de Medicina Veterinária, Universidade Federal Rural de Pernambuco, Rua Dom Manoel de Medeiros s/n, Recife, PE 52171-900, Brazil. E-mail: aurea@dmv.ufrpe.br This study was undertaken with the aim to evaluate the p53 expression, applying the immunohistochemical technique to malignant primary mammary neoplasms histopathologically diagnosed in female dogs, and to investigate exon 8 of the Tp53 suppressor gene for mutation types by means of PCR-RFLP pattern of bands. Nineteen healthy mammary glands were used as a control group (group 1). Samples from 18 cases diagnosed with malignant mammary tumors (group 2), and the contralateral mammary glands (group 3) were collected during the UFRPE Veterinary Hospital routine. The tumors were diagnosed by histopathology and subdivided into grades of malignity. The streptavidin-biotin peroxidase method was used to analyze the immunohistochemical expression of p53, evaluated according to the location and intensity of stain. Expression of p53 protein was not observed in the samples of group 1. On the contrary, it was observed in all malignant tumors; the protein p53 was localized either only in the nucleus or in the nucleus and in the cytoplasm, in samples of group 2. In group 3, expression of p53 protein was observed in the tumors (2 samples) and in normal mammary tissues (4 samples). For the molecular analyses, genomic DNA was extracted and submitted to PCR-RFLP with the following endonuclease enzymes: AluI, BsoBI, DdeI and SmaI. The band pattern showed polymorphism between groups, but not between histological variants of tumors. This polymorphism detected mutations in the fragment studied - exon 8 of Tp53 - which could account for changes in nucleotides, located in the restriction sites of the endonuclease enzymes. In conclusion, the immunoexpression of p53 had no relationship with histological subtype or malignity grade, but it can be related to the presence of mammary tumors in female dogs. The PCR-RFLP technique can be an important tool for the study of mammary carcinogenesis in bitches because the polymorphism obtained may allow early diagnosis in tissues of mammary glands.

• Expression of p53 protein exon 8 of Tp53 gene mammary carcinomas mammary glands proteína p53 éxon 8 do gene TP53 carcinomas mamários

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Teixeira M.J.D., Sobral A.P.V., Abreu-e-Lima M.C., Maia F.C.L., Christilis M., Souza D.M.B., Adrião M. & Wischral A. 2011. [Evaluation of immunohistochemical over expression of p53 protein and of mutations in exon 8 of Tp53 gene in canine mammary carcinomas and normal mammary glands.] Avaliação da superexpressão da proteína p53 e das mutações no éxon 8 do gene TP53 em carcinomas mamários caninos e glândulas normais. Pesquisa Veterinária Brasileira 31(6):521-523. Departamento de Medicina Veterinária, Universidade Federal Rural de Pernambuco, Rua Dom Manoel de Medeiros s/n, Recife, PE 52171-900, Brazil. E-mail: aurea@dmv.ufrpe.br Este estudo foi realizado com o objetivo de avaliar a expressão da proteína p53, pela técnica de imuno-histoquímica, em neoplasmas mamários malignos em cadelas, além de investigar mutações no éxon 8 do gene supressor Tp53 por meio do padrão de bandas obtidas por PCR-RFLP. Dezenove mamas de cadelas saudáveis foram usadas como controle (Grupo 1). Amostras de 18 casos de tumores malignos (Grupo 2) e suas glândulas mamárias contralaterais (Grupo 3) foram obtidas na rotina do Hospital Veterinário da UFRPE. Os tumores foram identificados histologicamente e classificados em graus de malignidade. O método da estreptoavidina-biotina peroxidase foi utilizado para a análise da expressão de p53 por imuno-histoquímica, de acordo com a localização e intensidade da coloração. A expressão da proteína p53 não foi observada nas amostras do Grupo 1, mas foi encontrada em todas as amostras de tumores malignos (Grupo 2) seja só no núcleo, ou também no citoplasma. No Grupo 3, a expressão foi observada em quatro amostras normais e em duas que apresentavam tumor. Para a análise molecular, o DNA genômico foi extraído e submetido à PCR-RFLP com as seguintes endonucleases: AluI, BsoBI, DdeI e SmaI. O padrão de bandas foi polimórfico entre os grupos, mas não entre as variantes tumorais. Esse polimorfismo detectou mutações no fragmento estudado - éxon 8 do gene Tp53 - que podem resultar em alterações nos nucleotídeos, localizados nos sítios de restrição das enzimas. Esses achados levam a conclusão de que a imunoexpressão da p53 não tem relação com o subtipo histológico ou grau de malignidade do tumor, mas sim com a presença dos tumores no tecido mamário de cadelas. A PCR-RFLP pode ser usada como importante ferramenta para o estudo da carcinogênese mamária na cadela, possibilitando gerar diagnósticos precoces através do polimorfismo obtido com endonucleases de restrição pré-selecionadas.